在免疫診斷試劑中，用于捕獲目的分子的抗原或抗體往往固定在固相載體如孔板、微球、膜等載體上，這些載體廣泛用于板式ELISA、免疫層析、乳膠比濁、化學發光、微流控技術等方法學的試劑盒中。固相載體結合捕獲抗原或抗體后，由于載體表面未結合位點的暴露或表面電荷變化或表面親疏水性的變化，都可能導致載體表面與樣本或反應體系中的蛋白質或生物分子發生非特異性吸附結合，影響試劑的特異性和靈敏度，甚至引發假陽性或假陰性的錯誤結果。此外，由于載體表面的微環境發生變化，還可能影響試劑的聚集性而導致試劑穩定性下降。

為了減少并防止固相載體表面的這種非特異性吸附結合，通過不參與反應的物質對固相載體表面進行封閉是一種很有效的方法；封閉劑能填充載體表面未結合位點，減少非特異性結合，穩定固相表面，降低背景信號，提升檢測的信噪比和準確性。

封閉劑對載體表面封閉的核心作用主要通過以下兩種方式實現：

1.機械填補：利用合適分子量的蛋白分子（如BSA、血清蛋白等）填充載體表面物理孔隙，減少非特異結合分子的物理性穿透；

2.吸附覆蓋：通過親疏水作用或靜電相互作用，封閉劑分子與載體表面形成單分子層覆蓋。

理想的封閉劑應能有效封閉載體表面未結合的位點，但對載體表面固定的捕獲分子的活性、結構和特異性都不影響；以實現降低載體表面非特異性結合、減少背景干擾、提高信噪比、穩定載體試劑的作用。

封閉劑種類繁多，常見的有：脫脂奶粉、BSA、酪蛋白酸鈉、甘氨酸、明膠、血清、吐溫、PEG、商品化合成封閉劑等。按封閉劑成分主要可以分為兩大類：蛋白或氨基酸類和化學合成類封閉劑。

脫脂奶粉、牛血清白蛋白（BSA）、酪蛋白酸鈉、甘氨酸、明膠及動物血清等含蛋白或氨基酸的成分，都是常用于固相載體表面封閉的封閉劑；脫脂奶粉和BSA等都是常見而又廣泛應用于免疫檢測試劑中的封閉劑。

脫脂奶粉中含有多種蛋白質，如乳清蛋白和酪蛋白等，由于其含有不同分子量的蛋白種類多，且成本低廉、易獲得的特點，被廣泛用于WB和ELISA中的膜孔徑封閉。但因其成分復雜的特點，也限制了主要用于定性檢測試劑中。

而BSA和酪蛋白酸鈉，則成分單一，且成本也較為低廉，適用于大多數應用常見，是脫脂奶粉不適用的應用場景中的有效替換解決方案；而且BSA和酪蛋白酸鈉用作封閉劑也都獲得了普遍的認可。但是， BSA由于含有少量脂肪酸或其他內源性物質，容易產生較為明顯的批次間差異；此外，在部分應用場景如小分子或藥物濫用檢測中，由于BSA的免疫原性，可能會導致檢測中出現針對BSA的交叉反應，這時可以選用酪蛋白酸鈉或無蛋白的封閉劑進行替換。

魚膠蛋白是一種小分子多肽，相較于常用的大分子蛋白，其與載體表面結合效果更好、封閉效率更高，可有效降低因封閉不足而導致的高背景。魚膠蛋白常來源深水魚皮，相比BSA和脫脂奶粉等動物來源，不會與哺乳動物蛋白質發生交叉反應；但因其可能含有內源性生物素，對biotin檢測系統可能會存在一定干擾。

血清封閉劑中天然存在豐富的蛋白（如白蛋白、球蛋白等），能與固相載體表面或樣本中的非特異結合物質進行結合或封閉，與BSA等原理類似；但是，樣本中可能存在部分Fc受體，血清中的抗體可以與Fc受體結合，避免其對抗體的干擾和結合，這是常規蛋白或非蛋白類封閉劑無法替代的。血清封閉劑，來源豐富，對復雜表面封閉效果好，但血清中可能存在內源性殘留干擾和物種間交叉反應的風險。

常見的一些非蛋白類化合物如：PVP、PEG、表面活性劑及商品化的合成聚合物封閉劑也都可以用于固相載體表面的封閉。

PVP、PEG都是水溶性的聚合物，可單獨、也可與其它封閉劑聯合使用，對載體表面起到封閉作用。PEG還可進一步通過側鏈或兩端的功能基團的修飾如氨基和羧基，增強其通過靜電相互作用結合到載體表面，改善載體表面的親水性。

表面活性劑如吐溫20等非離子型、兩親型、離子型表面活性劑，可通過分子中的疏水鏈端與載體表面的疏水區域結合，通過親水端或離子端的暴露，改善載體表面的親水性或表面離子的穩定性。

商品化的化學合成封閉劑，通常是合成的嵌段聚合物，由親水性的PEG長鏈和帶一定電荷的短鏈構成，可通過載體表面與聚合物間的親疏水相互作用或靜電相互作用或表面共價偶聯結合到載體表面，對其進行封閉及表面微環境改善，從而實現減少蛋白或分子非特異性結合的目的。

在體外診斷試劑開發中，科學選擇封閉劑是確保檢測結果準確性和靈敏度的重要環節。封閉劑的選擇需要綜合考慮技術平臺、樣本類型、分析物特征及成本等因素。

ELISA、Western Blot 等常規免疫檢測中，脫脂奶粉、血清封閉劑憑借全面的封閉效果和高性價比成為優選；而對于高靈敏度化學發光、病原體抗體檢測等場景，由于血清和脫脂奶粉的復雜成分和內源性成分干擾風險， BSA、酪蛋白或合成封閉劑等成為優選。此外，封閉劑的物種來源、批次間穩定性及生物安全性也是重要因素；只有經過系統驗證封閉劑與檢測系統的兼容性，才能更好的獲得高質量、高穩定性的試劑性能。

西寶生物作為優質的體外診斷原料供應商，可以提供豐富種類的封閉劑產品，包括常見的蛋白或氨基酸類封閉劑，也有化學合成或修飾改性類非蛋白封閉劑，相關產品信息如下，詳情請致電西寶生物400-021-8158。